Vid differentiell bestämning av enterobakterier och vissa vibrios tar Voges-Proskauer-reaktionen en speciell plats. Testet är baserat på bakteriers förmåga att fermentera glukos för att bilda acetoin.
Käran i forskningsprocessen
Inom mikrobiologin används Voges-Proskauer-reaktionen ofta för att skilja inom Yersinia-familjen av enterobakterier (inklusive patogenerna för pseudotuberkulos och enterokolit), Escherichia coli och sporbildande aerober. Resultatet visualiseras genom att färga mediet när vissa reagenser tillsätts.
Detta test tillhör IMViC-serien (förkortning av Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - en grupp av identifieringstester inklusive differentialdefinitioner:
- med indol, baserat på nedbrytningen av tryptofan till indol, använd i närvaro av ett Kovacs- eller Ehrlich-reagens;
- användarmetylroth, eller metylrött, som detekterar ett givet pH som ett resultat av glukosmetabolisering;
- Voges-Proskauer-reaktioner för detektering av acetyl-metylkarbinol;
- användning av citrat med färgförändring som ett resultat av alkalisering av mediet.
Kärnan i processen är visualiseringen av närvaron av diagnostiserade bakterier på grund av interaktionen av acetoin som bildas av dem med kaustikkali i närvaro av syre. Acetyl-metylkarbinol oxideras till diacetyl, som bildar en ljusröd eller rosa förening. Öka testets känslighet genom att införa alfa-naftol innan du tillsätter kaustik kaliumklorid.
Testinställning
Formuleringen av Voges-Proskauer-reaktionen involverar preliminär odling av mikroorganismer. En ren kultur sås på Clarks differentialdiagnostiska medium, en variant av detta är Clarks buljong (utan tillsats av agar-agar). Antingen används färdigt medium eller framställs självständigt. Ingredienser inkluderar:
- 5g pepton;
- 5g glukos;
- 5g tvåbasiskt kaliumfosfat;
- 1L destillat.
Under studien inokuleras kulturen med en steril bakteriologisk slinga i ett flytande medium. Kvantitet - 5 ml i ett provrör plus kontroll. Inkubation utförs vid en temperatur på 35-37 grader i två dagar. Därefter genomförs en studie av Voges-Proskauer-reaktionen i steg:
- 2, 5 ml buljongkultur överförs till ett sterilt rör.
- Tillsätt sex droppar alfa-naftol (5 % alkohollösning).
- Lägg till 40 %en lösning av kaustikkalium i en mängd av 0,1 ml, eller två droppar.
- Omrörning utförs genom att försiktigt skaka provröret.
- Utvärdera resultatet efter 15 minuter från början av experimentet.
En alternativ testmetod är inkubation över natten, vars tid reduceras till 18 timmar eller upp till en dag. Utöver denna metod används också ett expresstest: en kultur införs i en slinga i 2 ml av mediet, inkuberas i cirka fyra timmar, sedan tillsätts reagenser i en lika stor mängd av 2-3 droppar, blandas och resultatet utvärderas efter tio minuter.
Kontrollen är ett av de orsakande medlen för pneumoni Klebsiella pneumoniae - stam atcc 13883.
Utvärdering av resultatet
Efter den tid som krävs efter tillsats av reagens (från 5 till 15 minuter), bör en körsbärsröd färg observeras med en uttalad positiv reaktion, röd och rosa - med en svag positiv reaktion. Ingen förändring registreras som ett negativt resultat.
Överskott av kaustikkali i en lösning kan ge en imitation av en positiv reaktion, färgning i en kopparfärg. I detta fall ska det negativa svaret från den testade kolonin registreras. Kopparfärgning uppträder också i fall där bedömningen ges en timme efter införandet av reagenserna.
Vid utvärdering av resultatet måste man ta hänsyn till att långvarig odling av de studerade mikroorganismerna (mer än tre dagar) leder till försurning av mediet, vilket kan leda till ett felaktigt utfall av studien. Reaktionen kan vara svagt positiv ellerfalskt negativt.
Krav för testreagens
Voges-Proskauer-reagenser måste uppfylla krav som korrekt koncentration, hög renhet och stabilitet, vilket uppnås genom korrekt förvaring.
Färdiga testkit innehåller vanligtvis reagenser för 100 eller fler användningsområden och kommer i plast- eller tonade glasflaskor. Kvaliteten regleras av relevant dokumentation.
