Mångfalden av bakteriella infektioner kräver en tydlig identifiering av patogenen och definitionen av dess art. För att bestämma typen av mikroorganism, hjälps mikrobiologer av dess tinktoriella egenskaper - mikrobens känslighet för färgning med olika färgämnen. Denna metod låter dig utforska patogenens morfologi. Bakteriers tinktoriella egenskaper är av stor betydelse för praktisk och teoretisk forskning inom det mikrobiologiska området.
Mikrobiell forskning
Inom bakteriologi finns det många metoder för att färga mikroorganismer. Alla är baserade på bakteriers färgegenskaper. Färgning låter dig bestämma deras form, struktur, storlek, relativa position. Detta gör det möjligt att lösa problemen med att systematisera typerna av mikroorganismer inom allmän biologi och jämförande mikrobiologi.
Varför måla dem
Bakterier är praktiskt tagettransparenta organismer, och utan användning av färgning är de dåligt synliga för konventionell mikroskopi. Man kan använda speciella typer av mikroskopi (faskontrast, mörkt fält) för att studera föremål, men det enklaste sättet är att färga, varefter bakterierna blir synliga i ett konventionellt ljusmikroskop.
Provberedning
Oavsett vilken färgningsteknik som används finns det enhetliga regler för att förbereda föremålet som studeras. Följande steg är obligatoriska:
- Sterila instrument ger ett utstryk på en glasskiva.
- Provet håller på att torkas. Detta görs i rumstemperatur eller med torkskåp.
- Följt av fixeringsstadiet - mikroorganismer fästs på glaset med speciella föreningar.
- Korrekt färgning - provet täcks med färgämne under en bestämd tidsperiod, varefter det tvättas av.
- Slutlig torkning - provet torkas igen.
De vanligaste färgämnena
De vanligaste färgämnena är baserade på anilin med olika syravärden (pH). De flesta färgämnen är pulver som är utspädda i alkohol.
Färgämnen där katjoner är färgämnen kallas basiska (pH högre än 7). De kan användas för att färga mikroorganismer i röda (magenta, safranin), violett (metylviolett, tionin), blå (metylenblå), grön (malakitgrön), brun (chrysoidin) och svart (indulin) färger.
Färgämnen, där färgämnena är anjoner, kallas sura (pH mindre än 7). De kommer att färga provet rött (eosin), gult (picrin) eller svart (nigrosin).
Det finns en grupp neutrala färgämnen (till exempel rhodamin B), där både katjoner och anjoner fungerar som färgämnen.
Kultur död eller levande
Färgningsmetoder är indelade i två grupper beroende på testexemplarets livsform.
- Vital (livstid) färgning. Denna metod för att studera mikroorganismers egenskaper används i studien av levande vävnader, vilket gör det möjligt att observera mikrobers vitala processer. För denna färgning används färgämnen med låg toxicitet och hög penetreringsförmåga.
- Post-vital färgning. Detta är färgning av döda eller dödade mikroorganismer. Tack vare de färgande egenskaperna hos bakterier bestämmer mikrobiologer deras struktur. Det är denna färgning som används mest.
Gram-positiv och Gram-negativ
Det är dessa egenskaper hos bakterier som finns i bruksanvisningen för olika läkemedel. Denna metod för att studera bakteriers tinktoriella egenskaper är baserad på användningen av gentianviolett färgämne och jodfixering. Detta är tekniken av Hans Christian Gram, en dansk läkare som föreslog det 1884. Som ett resultat av denna färgning delas bakterier in i två grupper:
- Gram (+) - blir blå(stafylokocker och streptokocker).
- Gram (-) - färg rosa till röd (enterobakterier, salmonella, E. coli).
Olika färgningsresultat beror på olika färgegenskaper hos bakterieväggar. Gramfärgningsmetoden är fortfarande den viktigaste vid diagnosen av vissa infektionssjukdomar.
Andra färgningstekniker
Låt oss karakterisera några fler metoder som används ofta inom bakteriologi.
- Ziehl-Nelson-metoden - bestämmer bakteriers syraresistens. Den identifierar orsakerna till tuberkulos och mykobakterier.
- Romanovsky-Giemsa-teknik - färgar acidofila (ättiksyra och mjölksyra) bakterier röda och basofila (spirocheter och protozoer) blå.
- Morozovs teknik - färgar bakterier bruna och gör deras flageller synliga.
Spores kan ses
Tsiels fuchcinfärgning gör att du kan se bakteriesporer. Med en rosa färg efter färgning är de tydligt synliga mot bakgrund av blå bakterier. Denna metod är också ett bakteriologiskt verktyg och är av stor praktisk betydelse.
